Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CRF-BP Double Nickase Plasmid (h): sc-403849-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CRF-BP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CRF-BP Double-Nickase-Plasmid (h) und CRF-BP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRHBP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CRF-BP: sc-365975
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CRF-BP Double Nickase Plasmid (h) | sc-403849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRF-BP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRHBP kodiert das Corticotropin-Releasing-Factor-bindende Protein (CRF-BP), ein sezerniertes Glykoprotein, das CRH und verwandte Urocortine bindet, um die Bioverfügbarkeit der Liganden und deren Rezeptorbindung innerhalb der Hypothalamus-Hypophysen-Nebennierenrinden-(HPA)-Achse zu regulieren. Durch das Abpuffern frei verfügbarer Peptide der CRH-Familie moduliert CRF-BP nachgeschaltete CRHR1/CRHR2-Signalwege, die auf cAMP/PKA und Transkriptionsprogramme zusammenlaufen, welche die Stressreaktivität, die neuroendokrine Sekretion und den inflammatorischen Grundtonus steuern. Die CRHBP-Expression ist in Gehirn und peripheren Geweben ausgeprägt, wo sie die neuroimmunologische Kommunikation und die endokrine Homöostase beeinflussen kann. Eine Fehlregulation der CRH-/Urocortin-Signalgebung und der CRHBP-Expressionsmuster wurde mit stressassoziierten neuropsychiatrischen Phänotypen, veränderter metabolischer Regulation und entzündlichen Prozessen in Verbindung gebracht, was CRHBP für mechanistische Studien zu Stress-Schaltkreisen und zur peripheren CRF-Biologie relevant macht.
CRF-BP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRHBP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRHBP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRHBP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRHBP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.