Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRF-BP: sc-403849-ACT

CRHBP code pour la protéine de liaison au facteur de libération de la corticotropine (CRF-BP), une glycoprotéine sécrétée qui se lie aux peptides de la famille du CRF et module leur biodisponibilité, leur interaction avec les récepteurs et leur clairance. En modulant la signalisation du CRF, la CRF-BP influence la régulation de l’axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien (HHS), les réponses neuroendocriniennes au stress et, en aval, des programmes transcriptionnels dépendants de l’AMPc/PKA. L’expression de CRHBP et l’activité de la voie CRF/urocortine ont été impliquées dans des phénotypes neuropsychiatriques liés au stress, la signalisation inflammatoire et l’homéostasie métabolique. Dans les systèmes expérimentaux, la CRF-BP constitue un levier mécanistique pour étudier l’effet tampon sur les ligands et la signalisation des récepteurs du CRF, dépendante du contexte, dans des types cellulaires neuronaux et périphériques.

CRF-BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRHBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRF-BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRHBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRHBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRF-BP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRHBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRF-BP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRF-BP dans les cellules tumorales présentant une expression de CRHBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.