CREM Plasmide Double Nickase (h): sc-400406-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CREM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CREM Double Nickase Plasmid (h) e il CREM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CREM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CREM Antibody (22): sc-101530
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CREM Plasmide Double Nickase (h) | sc-400406-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CREM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400406-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CREM (cAMP response element modulator) è un fattore di trascrizione bZIP che si lega agli elementi di risposta al cAMP per regolare programmi di espressione genica dipendenti dallo stimolo. Nelle cellule umane integra la segnalazione cAMP/PKA e si interfaccia con le vie responsabili a MAPK e al calcio per controllare output trascrizionali coinvolti in proliferazione, differenziamento, metabolismo e sopravvivenza cellulare. CREM è particolarmente rilevante in neuroendocrinologia e nella biologia riproduttiva, dove contribuisce alla regolazione circadiana e ormonale di reti geniche. Un’attività di CREM deregolata è stata associata a stati trascrizionali alterati riportati in diversi contesti oncologici e immuno-correlati, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studi focalizzati sulle vie di segnalazione.
CREM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CREM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CREM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CREM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CREM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.