CREB3L3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402596-ACT

CREB3L3 (auch als CREBH bekannt) kodiert einen im ER lokalisierten bZIP-Transkriptionsfaktor, der bei metabolischem und entzündlichem Stress durch regulierte intramembranäre Proteolyse aktiviert wird, wodurch er in den Zellkern translozieren und die Transkription leberspezifischer Genprogramme steuern kann. Er koordiniert die Lipid- und Glukosehomöostase, indem er Signalwege moduliert, die am Triglyceridstoffwechsel, an der Fettsäureoxidation und an Akutphasenreaktionen beteiligt sind, mit nachgeschalteten Effekten auf Apolipoproteine und das Remodelling von Lipoproteinen. Die Aktivität von CREB3L3 überschneidet sich mit der ER-Stress-Signalübertragung und Netzwerken der angeborenen Immunität und verknüpft damit den Nährstoffstatus mit transkriptionellen Antworten von Hepatozyten. Eine Fehlregulation von CREB3L3 wurde mit kardiometabolischen Phänotypen wie Hypertriglyceridämie, der Pathobiologie der Fettleber und systemischer Entzündung in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Studien in Modellen metabolischer Erkrankungen relevant macht.

CREB3L3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CREB3L3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CREB3L3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CREB3L3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CREB3L3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CREB3L3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CREB3L3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CREB3L3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CREB3L3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CREB3L3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.