Particules Lentivirales d'Activation (h2) CRABP-II: sc-402978-LAC-2

Le gène humain CRABP2 code la protéine cellulaire de liaison à l’acide rétinoïque II (CRABP-II), un transporteur cytosolique de haute affinité qui tamponne l’acide rétinoïque tout-trans et facilite son acheminement vers les récepteurs nucléaires de l’acide rétinoïque afin de moduler des programmes transcriptionnels dépendants des rétinoïdes. En contrôlant la disponibilité du ligand et son trafic subcellulaire, CRABP-II influence la différenciation épithéliale, la maturation des kératinocytes et d’autres processus induits par l’acide rétinoïque, la reliant ainsi à la régulation de la prolifération, de l’apoptose et de réseaux géniques du développement. Une expression dérégulée de CRABP2 et une altération de la signalisation rétinoïde ont été associées à la biologie des cancers et à des dermatoses inflammatoires, ce qui fait de cette cible un élément pertinent pour étudier le remodelage des voies de signalisation et les réponses à l’acide rétinoïque spécifiques du contexte. L’édition génétique centrée sur CRABP2 permet une dissection mécanistique de la signalisation de l’acide rétinoïque, la cartographie des changements transcriptionnels et de la chromatine en aval de l’activation des RAR, ainsi que des criblages fonctionnels dans des modèles de différenciation et de tumorigenèse.

Les particules d'activation lentivirales CRABP-II (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CRABP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CRABP-II (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CRABP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CRABP-II. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CRABP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.