CRABP-II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402978-ACT

CRABP2 kodiert das zelluläre Retinsäure-bindende Protein 2 (CRABP-II), ein zytosolisches Transportprotein, das all-trans-Retinsäure mit hoher Affinität bindet und deren intrazelluläre Verfügbarkeit sowie die Signalstärke reguliert. Indem CRABP-II die Retinsäure zu nukleären Retinsäurerezeptoren (RARs) transportiert, prägt es Transkriptionsprogramme, die die epitheliale Differenzierung, die Biologie von Keratinozyten und die Entwicklungs­musterbildung steuern. Eine veränderte CRABP2-Expression wurde mit einer dysregulierten Retinoid-Signalgebung in krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Veränderungen von Proliferation, Migration und Differenzierungszuständen. Dieses Gen ist daher relevant für die Untersuchung retinoid-abhängiger Gennetzwerke, der Ligandenpufferung und kontextabhängiger transkriptioneller Umprogrammierung.

CRABP-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CRABP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CRABP-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CRABP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CRABP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CRABP-II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CRABP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CRABP-II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CRABP-II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CRABP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.