CRABP-I Double Nickase Plasmid (h2): sc-405485-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CRABP-I Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CRABP-I Double-Nickase-Plasmid (h2) und CRABP-I Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRABP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CRABP-I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CRABP1-Gen kodiert das zelluläre Retinsäure-bindende Protein 1 (CRABP-I), einen hochaffinen zytosolischen Carrier, der all-trans-Retinsäure sequestriert und transportiert und dadurch deren intrazelluläre Verfügbarkeit sowie die räumlich-zeitliche Signalgebung formt. Durch die Modulation der Retinoidverteilung beeinflusst CRABP-I retinsäureabhängige transkriptionelle Programme, die über nukleäre Rezeptoren (RAR/RXR) vermittelt werden, und wirkt sich auf Prozesse wie Differenzierung, Proliferation und entwicklungsbiologische Musterbildung aus. Eine veränderte Retinoidhomöostase und CRABP1-Expression wurden mit fehlregulierter Signalübertragung bei Krebs und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit dem Vitamin-A-Stoffwechsel und zellulären Differenzierungszuständen zusammenhängen. Geneditierung von CRABP1 sowie Perturbationsstudien ermöglichen die mechanistische Analyse von Retinoid-Signalnetzwerken, Ligandenpuffer-Dynamiken und transkriptionellen Ergebnissen in relevanten humanen Zellmodellen.
CRABP-I Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRABP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRABP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRABP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRABP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.