Plásmido Doble Nickase (h) CPTI: sc-401811-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CPTI consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CPTI (h) y el plásmido de doble nickasa CPTI (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CPT1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CPTI | sc-401811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CPTI | sc-401811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPT1A codifica la carnitina palmitoiltransferasa 1A (CPTI), la enzima limitante de la velocidad que transfiere grupos acilo de cadena larga a la carnitina para permitir su importación mitocondrial y la β-oxidación. Al controlar el flujo de ácidos grasos hacia la mitocondria, la CPTI coordina el catabolismo lipídico con el balance energético celular y se conecta con la señalización de AMPK, con programas transcripcionales regulados por PPAR y con la cetogénesis durante el estrés nutricional. La alteración de la actividad de CPT1A se ha asociado con errores congénitos de la oxidación de ácidos grasos y con fenotipos metabólicos que implican el manejo hepático de lípidos y la homeostasis de la glucosa. En biología del cáncer y de células inmunitarias, la oxidación de ácidos grasos dependiente de CPT1A se estudia con frecuencia como un determinante del control redox, de la supervivencia bajo estrés metabólico y de estados bioenergéticos específicos de linaje.
CPTI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPT1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPT1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPT1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPT1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.