CPSF2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407012

Descripción general

CPSF2 (factor de especificidad de escisión y poliadenilación, subunidad 2) es un componente central de la maquinaria mamífera de procesamiento del extremo 3′ del ARNm, que contribuye al reconocimiento de las señales de poliadenilación y al ensamblaje del complejo de escisión y poliadenilación. A través de su función en la escisión del pre-ARNm y la adición de la cola poli(A), CPSF2 influye en la maduración de los transcritos, la estabilidad del ARNm y la eficiencia de traducción, moldeando así programas globales de expresión génica. El procesamiento del extremo 3′ dependiente de CPSF2 también se conecta con la terminación de la transcripción y la poliadenilación alternativa, procesos que remodelan el transcriptoma durante la proliferación y la diferenciación. La desregulación de la formación del extremo 3′ y de la selección de sitios de poliadenilación se observa con frecuencia en estados de expresión asociados a enfermedades, lo que convierte a CPSF2 en un nodo útil para investigar fenotipos de procesamiento de ARN y sus efectos celulares posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPSF2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CPSF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CPSF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CPSF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPSF2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CPSF2 para la investigación de la señalización de CPSF2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CPSF2 críticos para la función de CPSF2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CPSF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CPSF2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CPSF2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CPSF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPSF2 (h) y el plásmido HDR CPSF2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CPSF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CPSF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.