Plasmide CRISPR d'Activation (h2) CPEB2: sc-409367-ACT-2

La CPEB2 humaine (cytoplasmic polyadenylation element binding protein 2) est une protéine se liant à l’ARN qui reconnaît les éléments de polyadénylation cytoplasmique présents dans les régions 3′ non traduites (3′ UTR) afin de réguler, de manière dépendante du contexte, la longueur de la queue poly(A), la stabilité des ARNm et la traduction. En coordonnant le contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique, CPEB2 contribue à des processus tels que la progression du cycle cellulaire, la reprogrammation traductionnelle en réponse au stress et la signalisation associée à l’hypoxie, via la modulation sélective de transcrits cibles. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CPEB2 ont été associées à une dérégulation du métabolisme de l’ARN et sont étudiées dans le contexte de la biologie du cancer, du fonctionnement neuronal et d’autres maladies où le contrôle traductionnel est perturbé. L’édition génétique de CPEB2 permet de disséquer les mécanismes des réseaux de régulation de l’ARN, de cartographier les effets traductionnels spécifiques à certains transcrits et d’interroger fonctionnellement le contrôle médié par les 3′ UTR dans des modèles de cellules humaines.

CPEB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CPEB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CPEB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CPEB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CPEB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CPEB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CPEB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CPEB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CPEB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CPEB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.