COX5a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405025-ACT

COX5A kodiert die Cytochrom-c-Oxidase-Untereinheit 5A (COX5a), eine im Zellkern kodierte Komponente des mitochondrialen Komplexes IV, die den Elektronentransfer auf Sauerstoff und eine effiziente oxidative Phosphorylierung unterstützt. Durch die Modulation von Assemblierung und Aktivität der Cytochrom-c-Oxidase beeinflusst COX5a den Fluss durch die Atmungskette, das mitochondriale Membranpotenzial und die ATP-Produktion, mit nachgelagerten Effekten auf die ROS-Signalgebung und die metabolische Anpassung. Eine veränderte Funktion von Komplex IV ist allgemein relevant für mitochondriale bioenergetische Dysfunktionen, die mit Neurodegeneration, kardiometabolischen Phänotypen und metabolischem Remodeling von Tumorzellen in Verbindung gebracht wurden. COX5A-Expression und die Integrität von Komplex IV werden daher häufig in Studien zu mitochondrialen Stressantworten, Hypoxieanpassung und energieabhängigen Entscheidungen über das Zellschicksal untersucht.

COX5a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COX5A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COX5a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COX5A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COX5A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COX5a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COX5A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COX5a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COX5a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COX5A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.