COPB Plasmide Double Nickase (h): sc-404275-NIC

COPB1 codifica la subunità COPB del complesso coatomerico I (COPI), un componente fondamentale del rivestimento delle vescicole che mediano il trasporto retrogrado dal Golgi al reticolo endoplasmatico e regolano il traffico intra-Golgi. Attraverso il suo ruolo nella selezione del carico e nella gemmazione delle vescicole, COPB contribuisce al mantenimento dell’architettura del Golgi, all’omeostasi del RE e al flusso della via secretoria, intersecandosi con processi di proteostasi e di risposta allo stress come la risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response, UPR). L’alterazione della funzione di COPI può compromettere lo smistamento proteico e la dinamica delle membrane, con effetti a valle sulla vitalità cellulare e sulla segnalazione, rendendo COPB1 un nodo utile per studiare la comunicazione tra organelli e il traffico di membrana nelle cellule umane. Le vie di trasporto intracellulare disregolate sono spesso implicate nei meccanismi di malattie proliferative e del neurosviluppo, stimolando la ricerca su fenotipi di traffico dipendenti da COPB1.

COPB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COPB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COPB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COPB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COPB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.