Contactin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406301

Übersicht

CNTN2 kodiert Contactin 2 (TAG-1), ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Zelladhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie, das im Nervensystem besonders stark exprimiert wird. Contactin 2 unterstützt die Axonführung, das Neuritenwachstum und die Stabilisierung von Neuron-Glia-Interaktionen, indem es Zelloberflächen-Erkennungskomplexe organisiert und während der Bildung neuronaler Schaltkreise das Zytoskelett-Remodeling beeinflusst. Über Wechselwirkungen mit der extrazellulären Matrix und Adhäsionspartnern trägt es zur Bildung und Aufrechterhaltung spezialisierter Membrandomänen wie Axoninitialsegmenten und Juxtaparanoden bei. Eine veränderte CNTN2-Expression oder -Funktion wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was CNTN2 für Studien zur synaptischen Konnektivität und neuronalen Erregbarkeit relevant macht.

Das Contactin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNTN2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNTN2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNTN2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Contactin 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNTN2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Contactin 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CNTN2-Exone abzielen, die für die Contactin 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNTN2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Contactin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Contactin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNTN2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Contactin 2 HDR-Plasmid (h) und Contactin 2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNTN2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNTN2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.