connexin 50 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404332-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- connexin 50O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase connexin 50 (h) e o Plasmídeo Double Nickase connexin 50 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GJA8. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:connexin 50 Anticorpo (B-11): sc-373801
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
connexin 50 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 50 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA8 codifica a conexina 50, uma proteína de junções comunicantes (gap junctions) que se monta em conexons hexaméricos para mediar a troca intercelular de íons e pequenos metabólitos. No cristalino ocular, a conexina 50 sustenta a comunicação entre células epiteliais e fibras, contribuindo para a homeostase do cristalino, a transparência e a diferenciação coordenada durante o desenvolvimento. A sua atividade interage com processos que regulam a permeabilidade da membrana, a sinalização de cálcio e a manutenção do sistema de microcirculação do cristalino que sustenta a fisiologia de um tecido avascular. A perturbação do acoplamento dependente de GJA8 está associada a alterações na organização das fibras do cristalino e a fenótipos relacionados a catarata, tornando-o um ponto de entrada útil para estudar a biologia de junções comunicantes em modelos oculares.
connexin 50 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GJA8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GJA8. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GJA8. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GJA8 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.