connexin 43 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400241-LAC

GJA1 kodiert Connexin 43 (Cx43), ein zentrales Gap-Junction-Protein, das sich zu Connexonen zusammenlagert und so den direkten interzellulären Austausch von Ionen und kleinen Metaboliten ermöglicht. Dadurch koordiniert Cx43 die elektrische und metabolische Kopplung zwischen Zellen in Geweben. Cx43 reguliert kontaktabhängige Signalübertragung in Prozessen wie der kardialen Erregungsleitung, der Wundheilung und der Gewebehomöostase, wobei diese Regulation dynamisch über Phosphorylierung, intrazelluläres Trafficking und Proteinumsatz gesteuert wird. Über seine Kanalfunktion hinaus beeinflusst Connexin 43 die Organisation des Zytoskeletts sowie Signalkaskaden wie MAPK/ERK und PKC, die Proliferation, Differenzierung und Stressantworten prägen. Eine fehlregulierte GJA1-Expression oder ein Remodeling der Connexin-43-Kanäle wurde mit arrhythmogenen Phänotypen, beeinträchtigten Barriere- und Reparaturprogrammen sowie veränderter Tumor–Stroma-Kommunikation bei mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht.

connexin 43 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GJA1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

connexin 43 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GJA1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen connexin 43-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GJA1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.