Particules Lentivirales d'Activation (h) connexin 43: sc-400241-LAC

GJA1 code la connexine 43 (Cx43), une protéine majeure des jonctions communicantes qui s’assemble en connexons afin de permettre l’échange intercellulaire direct d’ions et de petits métabolites, coordonnant le couplage électrique et métabolique au sein des tissus. Cx43 régule la signalisation dépendante du contact dans des processus tels que la propagation de l’influx cardiaque, la réparation des plaies et l’homéostasie tissulaire, avec un contrôle dynamique via la phosphorylation, le trafic intracellulaire et le renouvellement. Au-delà de sa fonction de canal, la connexine 43 influence l’organisation du cytosquelette et des cascades de signalisation telles que MAPK/ERK et PKC, qui façonnent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Une expression dérégulée de GJA1 ou un remodelage des canaux de connexine 43 a été associé à des phénotypes arythmogènes, à une altération des programmes de barrière et de réparation, ainsi qu’à une communication modifiée entre tumeur et stroma dans de nombreux cancers.

Les particules d'activation lentivirales connexin 43 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GJA1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales connexin 43 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GJA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de connexin 43. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GJA1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.