connexin 43 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420556-ACT

Das murine Gen **Gja1** kodiert Connexin 43 (Cx43), ein dominantes Gap-Junction-Protein, das interzelluläre Kanäle bildet und so den direkten Austausch von Ionen und kleinen Metaboliten ermöglicht, um die Gewebehomöostase zu koordinieren. Cx43 reguliert die elektrische Kopplung sowie synchronisierte Signalübertragung über Calcium- und cAMP-Flüsse und beeinflusst dadurch Proliferation, Differenzierung und Stressantworten in vielen Zelltypen. Über seine Funktionen in der Gap-Junction-vermittelten interzellulären Kommunikation und in der Hemikanal-Aktivität wirkt Connexin 43 auf Wundheilung, Entzündung und Entwicklungsprozesse ein, indem es Signalwege moduliert, die mit MAPK, PKC und der Zytoskelettdynamik verknüpft sind. Eine fehlregulierte Gja1/Cx43-Expression oder Kanalfunktion ist mit veränderter Zell‑Zell‑Kommunikation in kardiovaskulären und neuroinflammatorischen Kontexten sowie mit Tumorbiologie und fibrotischem Remodeling assoziiert, weshalb Cx43 häufig Ziel mechanistischer Studien ist.

connexin 43 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Gja1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

connexin 43 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Gja1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Gja1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen connexin 43-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Gja1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von connexin 43-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des connexin 43-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Gja1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.