connexin 37 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420559-ACT

Das Mausgen **Gja4** kodiert Connexin 37 (Cx37), eine Untereinheit von Gap-Junction-Kanälen, die sich zu Connexonen zusammenlagert und so eine direkte interzelluläre Kommunikation über Ionen und kleine Metaboliten vermittelt. Eine Cx37-abhängige Kopplung hilft, die Endothelfunktion, den Gefäßtonus sowie die Signalübertragung zwischen glatten Muskelzellen und Endothel zu koordinieren und beeinflusst Prozesse wie Scherstressantworten, Zellzykluskontrolle und Gewebehomöostase. Im Gefäß- und Lymphsystem wurde eine veränderte connexinvermittelte Signalgebung mit dysregulierter Angiogenese, Entzündung und vaskulärem Remodeling in Verbindung gebracht, wodurch **Gja4** ein nützlicher Genlokus zur Untersuchung von Mechanismen ist, die kardiovaskulären und lymphatischen Phänotypen zugrunde liegen. Da die Zusammensetzung von Gap Junctions die Signalausbreitung zwischen benachbarten Zellen prägt, ist eine Modulation von **Gja4** auch für Untersuchungen zur Barriereintegrität und zur Kontrolle des Zellverhaltens durch das Mikromilieu relevant.

connexin 37 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Gja4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

connexin 37 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Gja4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Gja4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen connexin 37-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Gja4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von connexin 37-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des connexin 37-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Gja4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.