Partículas Lentivirales de Activación (h) connexin 26: sc-402132-LAC

GJB2 codifica la conexina 26, una proteína de canales de uniones comunicantes (gap junctions) que se ensambla en conexones para mediar el intercambio intercelular directo de iones y pequeños metabolitos, lo que favorece el acoplamiento eléctrico y metabólico. La conexina 26 regula la homeostasis tisular al coordinar la señalización en epitelios y tejidos sensoriales, con efectos sobre la diferenciación celular, las respuestas al estrés y la función de barrera. La alteración de la expresión de GJB2 o de la función del canal de conexina 26 está fuertemente asociada a la pérdida auditiva hereditaria y a otros trastornos de la fisiología epitelial, por lo que es un objetivo ampliamente utilizado en modelos de biología coclear y de comunicación mediante uniones comunicantes. En investigación, la conexina 26 ofrece un punto de entrada manejable para estudiar la dinámica de las uniones comunicantes, la conectividad celular y el control transcripcional de las proteínas de unión.

Las partículas de activación lentiviral connexin 26 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GJB2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral connexin 26 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GJB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de connexin 26. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GJB2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.