connexin 26 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402132-LAC

GJB2 kodiert Connexin 26, ein Gap-Junction-Kanalprotein, das sich zu Connexonen zusammenlagert und den direkten interzellulären Austausch von Ionen und kleinen Metaboliten vermittelt, wodurch elektrische und metabolische Kopplung unterstützt wird. Connexin 26 reguliert die Gewebehomöostase, indem es die Signalübertragung in Epithelien und sensorischen Geweben koordiniert, mit Auswirkungen auf Zelldifferenzierung, Stressantworten und Barrierefunktion. Eine veränderte GJB2-Expression oder eine gestörte Kanalfunktion von Connexin 26 ist eng mit hereditärem Hörverlust und anderen Störungen der Epithelphysiologie verknüpft, weshalb es ein häufig verwendetes Ziel in Modellen der Cochlea-Biologie und der Gap-Junction-Kommunikation ist. In der Forschung bietet Connexin 26 einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um Gap-Junction-Dynamik, zelluläre Konnektivität und die transkriptionelle Kontrolle von Junction-Proteinen zu untersuchen.

connexin 26 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GJB2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

connexin 26 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GJB2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen connexin 26-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GJB2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.