Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
connexin 26 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420565
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- connexin 26 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico connexin 26, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: connexin 26 Antibody (P1F5): sc-517456
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
connexin 26 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420565 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Gjb2 codifica la connessina 26 (Cx26), una proteina delle giunzioni comunicanti (gap junction) che si assembla in connessoni esamerici per formare canali intercellulari, consentendo lo scambio diretto di ioni e piccoli metaboliti. Coordinando l’accoppiamento elettrico e metabolico, Cx26 sostiene l’omeostasi tissutale, la funzione di barriera dell’epitelio e la sincronizzazione delle risposte cellulari a stress e segnali di differenziamento. La connessina 26 partecipa a processi legati alla segnalazione del calcio, all’equilibrio redox e alla regolazione della proliferazione e dell’apoptosi mediata dal contatto. L’alterazione della funzione di Gjb2 è fortemente associata a deficit uditivi sindromici e non sindromici ed è inoltre implicata in disturbi della differenziazione epidermica, in cui una comunicazione gap-junction alterata contribuisce alla patologia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 26 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gjb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gjb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gjb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina connexin 26.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gjb2 per lo studio della segnalazione di connexin 26, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Gjb2 critici per la funzione di connexin 26
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gjb2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal connexin 26 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal connexin 26 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gjb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal connexin 26 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR connexin 26 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gjb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gjb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.