Conductin Lentiviral Activation Particles (m): sc-419278-LAC

Das murine Axin2-Gen kodiert Conductin, ein Gerüstprotein (Scaffold-Protein), das als zentraler negativer Rückkopplungsregulator des kanonischen Wnt/β‑Catenin-Signalwegs fungiert. Conductin fördert den Abbau von β‑Catenin, indem es die Komponenten des Destruktionskomplexes koordiniert, und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme, die die Aufrechterhaltung von Stammzellen, Proliferation und Differenzierung steuern. Als direktes Wnt-Zielgen wird die Axin2-Expression häufig als Readout der Signalwegaktivität und der oszillatorischen Signaldynamik während der Entwicklung und der Gewebehomöostase verwendet. Eine fehlregulierte, AXIN2/Conductin-gekoppelte Wnt-Signalgebung ist an der Tumorentstehung, an Störungen der skelettalen und kraniofazialen Musterbildung sowie am Remodeling des intestinalen Epithels beteiligt und ist damit relevant für Modelle der Krebsbiologie und regenerativer Prozesse.

Conductin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Axin2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Conductin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Axin2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Conductin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Axin2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.