COL9A2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405890-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL9A2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL9A2 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL9A2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL9A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL9A2: sc-398130
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL9A2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL9A2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL9A2 kodiert die Alpha-2-Kette des Kollagens Typ IX, eines FACIT-Kollagens, das Kollagen‑II‑Fibrillen dekoriert und zur Organisation der extrazellulären Matrix des hyalinen Knorpels beiträgt. Über seine Wechselwirkungen mit Kollagen II/XI und Proteoglykanen unterstützt COL9A2 die Stabilisierung der Fibrillen, die Zugfestigkeit des Knorpels sowie die Regulation der Signalübertragung zwischen Chondrozyten und Matrix, die für die Skelettentwicklung und die Gewebehomöostase relevant ist. Eine veränderte Funktion oder Expression von COL9A2 wird mit einer Desorganisation der Knorpelmatrix und erblichen Chondrodysplasien in Verbindung gebracht und wurde zudem mit einer erhöhten Anfälligkeit für degenerative Gelenkphänotypen assoziiert. Als Bestandteil der Knorpel‑ECM wird COL9A2 häufig in Signal- und Prozesswegen untersucht, die den Aufbau der extrazellulären Matrix, die Mechanotransduktion und knorpelspezifische Differenzierungsprogramme steuern.
COL9A2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL9A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL9A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL9A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL9A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.