COL6A3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402899-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL6A3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL6A3 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL6A3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL6A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL6A3: sc-515335
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL6A3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL6A3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane COL6A3 kodiert die α3‑Kette des Kollagens Typ VI, einer zentralen Komponente der extrazellulären Matrix, die sich zu mikrofibrillären Netzwerken zusammenlagert und so die Zugfestigkeit von Geweben sowie die Mechanotransduktion unterstützt. COL6A3 trägt zur Zell‑Matrix‑Adhäsion, zur Organisation der Matrix und zur Wechselwirkung mit Integrin‑ und TGF‑β‑gekoppelten Signalwegen bei, die die Aktivierung von Fibroblasten, die Myogenese und das stromale Remodeling beeinflussen. Eine veränderte COL6A3‑Expression oder Matrixablagerung ist mit Bindegewebs‑ und neuromuskulären Phänotypen assoziiert; zudem wird COL6A3 häufig in der Fibroseforschung und in der Biologie des Tumormikromilieus untersucht, wo die Zusammensetzung der extrazellulären Matrix Zellmigration und Differenzierung prägt. Als Matrixgen mit starker Kontextabhängigkeit wird COL6A3 häufig in 3D‑Kulturen, Organoid‑ und Kokultursystemen analysiert, um ECM‑getriebene Veränderungen des Zellverhaltens zu untersuchen.
COL6A3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL6A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL6A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL6A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL6A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.