Plásmido CRISPR de Activación (h) COL6A3: sc-402899-ACT

COL6A3 codifica la cadena alfa-3 del colágeno tipo VI, un componente clave de la matriz extracelular que se ensambla en microfibrillas con aspecto de cuentas que sostienen la arquitectura tisular y la mecanotransducción. Las matrices ricas en COL6A3 influyen en la adhesión, la migración y la señalización de supervivencia celular a través de vías vinculadas a integrinas y adhesiones focales, modelando la organización del estroma y la remodelación extracelular. La expresión desregulada de COL6A3 y las alteraciones de la red de colágeno VI se asocian con programas de remodelación similares a la fibrosis y con cambios en la composición del microambiente tumoral, y se han vinculado variantes en genes del colágeno VI con fenotipos hereditarios del tejido conectivo y neuromusculares. Como gen estructural de la matriz con intercomunicación de señales, COL6A3 se utiliza ampliamente para estudiar el ensamblaje de la MEC, las interacciones estroma–epitelio y las respuestas de remodelación a señales inflamatorias o mecánicas.

COL6A3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL6A3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL6A3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL6A3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL6A3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL6A3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL6A3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL6A3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL6A3 en células tumorales con expresión de COL6A3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.