Plásmido Doble Nickase (h) COL4A5: sc-401199-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COL4A5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COL4A5 (h) y el plásmido de doble nickasa COL4A5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COL4A5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COL4A5 | sc-401199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COL4A5 | sc-401199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A5 codifica la cadena α5 del colágeno tipo IV, un componente estructural central de las membranas basales que, junto con COL4A3 y COL4A4, se ensambla en la red α3α4α5(IV). Este armazón especializado de colágeno sostiene la integridad de las membranas basales glomerulares, cocleares y oculares, e influye en la adhesión célula–matriz, la mecanotransducción y la remodelación de la matriz extracelular mediante interacciones con integrinas y vías de señalización asociadas. La alteración de COL4A5 modifica la composición de la membrana basal y las propiedades de la barrera de filtración, lo que vincula su disfunción con la nefropatía hereditaria y con manifestaciones sindrómicas que afectan la audición y la visión. Por ello, COL4A5 se estudia ampliamente en el desarrollo renal, la biología de los podocitos y la organización de la matriz extracelular mediante modelos celulares y organoides.
COL4A5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL4A5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL4A5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL4A5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL4A5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.