COL4A5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401199-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL4A5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL4A5 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL4A5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL4A5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL4A5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A5 kodiert die α5-Kette des Typ-IV-Kollagens, einen zentralen strukturellen Bestandteil von Basalmembranen, der sich zusammen mit COL4A3 und COL4A4 zum α3α4α5(IV)-Netzwerk zusammenlagert. Dieses spezialisierte Kollagengerüst gewährleistet die Integrität der glomerulären, cochleären und okulären Basalmembranen und beeinflusst über Interaktionen mit Integrinen und assoziierten Signalwegen die Zell–Matrix-Adhäsion, die Mechanotransduktion sowie das Remodeling der extrazellulären Matrix. Eine Störung von COL4A5 verändert die Zusammensetzung der Basalmembran und die Eigenschaften der Filtrationsbarriere und verknüpft seine Fehlfunktion mit hereditären Nephropathien sowie syndromalen Merkmalen, die das Hören und Sehen betreffen. COL4A5 wird daher in Modellen auf Zell- und Organoidbasis häufig im Kontext der Nierenentwicklung, der Podocytenbiologie und der Organisation der extrazellulären Matrix untersucht.
COL4A5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL4A5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL4A5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL4A5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL4A5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.