COL4A2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401462-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL4A2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL4A2 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL4A2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL4A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL4A2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401462-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401462-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A2 kodiert die Alpha-2-Kette von Typ-IV-Kollagen, einem wesentlichen strukturellen Bestandteil von Basalmembranen, der sich zu COL4A1/COL4A2-Heterotrimeren und zu übergeordneten Kollagen-IV-Netzwerken zusammenlagert. Dieses extrazelluläre Matrixgerüst stabilisiert die Gewebearchitektur, reguliert die Permeabilität und organisiert Signal-Mikroumgebungen, die über integrin- und matrixabhängige Signalwege Zelladhäsion, Migration und Differenzierung beeinflussen. COL4A2 ist zentral für die Biogenese der Basalmembran und die vaskuläre Integrität; Varianten werden mit Erkrankungen kleiner Gefäße und Basalmembrandefekten in Verbindung gebracht, die häufig ausgeprägte zerebrovaskuläre und okuläre Manifestationen zeigen. Als Matrixgen mit breiten entwicklungs- und gewebespezifischen Funktionen wird COL4A2 häufig in der Endothelbiologie, der Funktion der neurovaskulären Einheit und dem Umbau der extrazellulären Matrix untersucht.
COL4A2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL4A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL4A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL4A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL4A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.