COL2A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400359

Descripción general

COL2A1 codifica la cadena α1 del colágeno tipo II, un colágeno fibrilar mayoritario que forma el armazón estructural del cartílago hialino y contribuye a las propiedades biomecánicas de la matriz extracelular. Mediante su ensamblaje en fibrillas de colágeno II y sus interacciones con los proteoglicanos, COL2A1 favorece la diferenciación de los condrocitos, la organización de la matriz y la homeostasis del cartílago durante el desarrollo esquelético. La expresión de COL2A1 está regulada por programas transcripcionales condrogénicos, como las vías impulsadas por SOX9, y se coordina con redes de procesamiento del colágeno, secreción y remodelación de la matriz extracelular. La alteración genética o la desregulación de COL2A1 se asocia con un espectro de trastornos hereditarios del cartílago y del esqueleto, lo que lo convierte en una diana clave para estudiar la biología de la matriz extracelular y la patología de los condrocitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL2A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL2A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL2A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL2A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL2A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL2A1 para la investigación de la señalización de COL2A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COL2A1 críticos para la función de COL2A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL2A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL2A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL2A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL2A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL2A1 (h) y el plásmido HDR COL2A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL2A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL2A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.