COL2A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400359

Übersicht

COL2A1 kodiert die α1‑Kette von Kollagen Typ II, einem wichtigen fibrillären Kollagen, das das strukturelle Gerüst des hyalinen Knorpels bildet und zu den biomechanischen Eigenschaften der extrazellulären Matrix beiträgt. Durch die Assemblierung zu Kollagen‑II‑Fibrillen und Wechselwirkungen mit Proteoglykanen unterstützt COL2A1 die Differenzierung von Chondrozyten, die Organisation der Matrix und die Knorpelhomöostase während der Skelettentwicklung. Die Expression von COL2A1 wird durch chondrogene Transkriptionsprogramme wie SOX9‑gesteuerte Signalwege reguliert und ist mit Netzwerken der Kollagenprozessierung, -sekretion und des Umbaus der extrazellulären Matrix koordiniert. Eine genetische Störung oder Fehlregulation von COL2A1 ist mit einem Spektrum vererbbarer Knorpel- und Skeletterkrankungen verbunden, was es zu einem zentralen Ziel für die Erforschung der Biologie der extrazellulären Matrix und der Chondrozytenpathologie macht.

Das COL2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COL2A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COL2A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COL2A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL2A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COL2A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL2A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COL2A1-Exone abzielen, die für die COL2A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COL2A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COL2A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COL2A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL2A1 HDR-Plasmid (h) und COL2A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COL2A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COL2A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.