COL17A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402747-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL17A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL17A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL17A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL17A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL17A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402747-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL17A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402747-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL17A1 kodiert Kollagen Typ XVII Alpha 1, eine transmembrane Komponente von Hemidesmosomen, die basale Keratinozyten über Interaktionen mit Laminin‑332 und Integrinen an die Basalmembran verankert. Durch die Stabilisierung der dermo‑epidermalen Adhäsion und die Organisation von Kontakten zur extrazellulären Matrix unterstützt COL17A1 die Integrität der Epidermis, die mechanische Widerstandsfähigkeit und die epitheliale Homöostase. Eine veränderte Expression oder Funktion von COL17A1 ist mit blasenbildenden Hautphänotypen und autoimmuner Zielstruktur an der dermo‑epidermalen Junktionszone verknüpft; zudem wird es im Zusammenhang mit epithelialem Remodeling und Tumorinvasion untersucht. Diese Eigenschaften machen COL17A1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Adhäsionssignalwegen, Matrix‑Zell‑Grenzflächen und der Stabilität von Zellkontakten in humanen epithelialen Systemen.
COL17A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL17A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL17A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL17A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL17A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.