COL12A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402361-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL12A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL12A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL12A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL12A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL12A1: sc-166020
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL12A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL12A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes COL12A1 kodiert die Kollagen‑Typ‑XII‑α1‑Kette, ein fibrillenassoziiertes Kollagen, das in der extrazellulären Matrix lokalisiert ist und mit Kollagen‑I‑haltigen Fibrillen interagiert, um die Matrixarchitektur, Zugfestigkeitseigenschaften und die Zell‑Matrix‑Kommunikation zu regulieren. Über seine Funktionen in der Kollagenfibrillogenese, Gewebeorganisation und Mechanotransduktion trägt COL12A1 zur Kopplung an das Zytoskelett und zu Signalwegen bei, die Adhäsions‑ und Migrationsprogramme prägen. Eine veränderte Expression oder Funktion von COL12A1 wurde mit erblichen Bindegewebserkrankungen sowie Phänotypen in Verbindung gebracht, die die Muskel‑ und Skelettintegrität betreffen, was es für Studien zum Matrix‑Remodeling und zur Entwicklungsbiologie relevant macht. In der Krebs‑ und Fibroseforschung wird COL12A1 häufig als Teil stromaler extrazellulärer Matrix‑Signaturen untersucht, die mit Veränderungen der Gewebesteifigkeit und invasivem Verhalten assoziiert sind.
COL12A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL12A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL12A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL12A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL12A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.