COL12A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402361

Übersicht

COL12A1 kodiert die Alpha-1-Kette des Kollagens Typ XII, ein fibrillenassoziiertes Kollagen mit unterbrochenen Tripelhelices (FACIT), das in der extrazellulären Matrix lokalisiert ist und mit Kollagenfibrillen vom Typ I assoziiert. Durch die Verknüpfung fibrillärer Kollagene mit anderen Matrixkomponenten trägt COL12A1 zur Zugfestigkeit von Geweben, zur Mechanotransduktion und zur Organisation der perizellulären Matrix bei und beeinflusst dadurch Zelladhäsion und -migration. Seine Funktion ist eng mit Signalwegen des Remodellings der extrazellulären Matrix sowie mit integrinvermittelter Signalübertragung verbunden, die die stromale Architektur während Entwicklung und Reparatur prägen. Veränderte COL12A1-Expression oder Varianten wurden mit erblichen Bindegewebsphänotypen und muskuloskelettalen Funktionsstörungen in Zusammenhang gebracht, was COL12A1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung matrixgetriebener Krankheitsmechanismen macht.

Das COL12A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COL12A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COL12A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COL12A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL12A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COL12A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL12A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COL12A1-Exone abzielen, die für die COL12A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COL12A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL12A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COL12A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COL12A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL12A1 HDR-Plasmid (h) und COL12A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COL12A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COL12A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.