COG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416653

Übersicht

COG4 kodiert eine zentrale Untereinheit des konservierten oligomeren Golgi-(COG-)Tethering-Komplexes, der die Golgi-Architektur aufrechterhält und den retrograden Vesikeltransport innerhalb der Golgi-Zisternen koordiniert. Durch die Regulation des Vesikel-Andockens und der SNARE-abhängigen Fusion unterstützt COG4 das Recycling von Glykosylierungsenzymen sowie die korrekte Verarbeitung sekretorischer und membranständiger Proteine im gesamten Endomembransystem. Eine Störung der COG-Komplex-Funktion beeinträchtigt den Golgi-zu-ER- sowie den intra-Golgi-Transport, was zu veränderter Proteinglykosylierung und weitreichenden Effekten auf Sekretion, Rezeptorreifung und Membranzusammensetzung führt. Varianten in COG4 und verwandten COG-Komponenten sind mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert, wodurch dieses Gen für die Untersuchung Golgi-Transport-gekoppelter Krankheitsmechanismen relevant ist.

Das COG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COG4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COG4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COG4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COG4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COG4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COG4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COG4-Exone abzielen, die für die COG4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COG4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COG4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COG4 HDR-Plasmid (h) und COG4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COG4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COG4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.