Cochlin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405944

Übersicht

COCH kodiert Cochlin, ein sezerniertes Protein der extrazellulären Matrix, das im Innenohr stark angereichert ist und dort zur strukturellen Organisation sowie zur mechanischen Homöostase von Hör- und Gleichgewichtsgeweben beiträgt. Cochlin enthält LCCL- und von-Willebrand-Faktor-A‑ähnliche Domänen, die Matrixinteraktionen unterstützen und möglicherweise die Zell‑Matrix‑Signalübertragung, den Gewebeumbau und Entzündungsreaktionen beeinflussen. Eine veränderte COCH-Funktion ist mit erblichen Hör- und Gleichgewichtsstörungen verknüpft, und Cochlin-Ablagerungen wurden mit degenerativen Veränderungen in der Cochlea und im Vestibularapparat in Verbindung gebracht. Als matrixassoziiertes Protein wird Cochlin in Signalwegen untersucht, die den Aufbau der extrazellulären Matrix, die Mechanotransduktion und Stressantworten in sensorischen Epithelien steuern.

Das Cochlin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COCH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COCH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COCH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cochlin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COCH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cochlin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COCH-Exone abzielen, die für die Cochlin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COCH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cochlin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cochlin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COCH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cochlin HDR-Plasmid (h) und Cochlin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COCH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COCH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.