Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
CNTFRα Double Nickase Plasmid (h): sc-402322-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CNTFRα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CNTFRα Double-Nickase-Plasmid (h) und CNTFRα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CNTFR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CNTFRα: sc-9993
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CNTFRα Double Nickase Plasmid (h) | sc-402322-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CNTFRα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402322-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der ziliäre neurotrophe Faktor-Rezeptor alpha (CNTFRα), kodiert durch CNTFR, ist eine über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankerte Rezeptor-Untereinheit, die innerhalb des CNTF-Rezeptorkomplexes die Ligandenbindungsspezifität vermittelt. Nach Bindung von CNTF kooperiert CNTFRα mit LIFR und gp130, um die JAK/STAT-Signalübertragung zu initiieren; zusätzlich besteht eine Kopplung an die MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege, die das neuronale Überleben, die Differenzierung und die Glia-Biologie regulieren. Die Aktivität des CNTFR-Signalwegs wird häufig im Kontext von Neuroentwicklung und Neurodegeneration untersucht, da veränderte Rezeptorexpression oder Signalstärke die Aufrechterhaltung von Neuronen und die Antwort auf Verletzungen beeinflussen kann. Eine Fehlregulation der CNTF/CNTFR-Achsen-Signalgebung wurde in Modellen von Motoneuron- und Netzhauterkrankungen mit krankheitsrelevanten zellulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen in menschlichen Zellsystemen unterstützt.
CNTFRα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CNTFR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CNTFR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CNTFR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CNTFR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.