CNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402463

Übersicht

CNP kodiert die 2',3'-zyklische Nukleotid-3'-Phosphodiesterase (CNPase), ein myelinassoziiertes Enzym, das in Oligodendrozyten angereichert ist, 2',3'-zyklische Nukleotide hydrolysiert und zur Bildung sowie Aufrechterhaltung der Myelinscheide beiträgt. CNPase lokalisiert in nicht-kompaktem Myelin sowie in zytoskelettalen/membranständigen Mikrodomainen, wo sie mit dem RNA-Stoffwechsel, dem Auswachsen von Zellfortsätzen und der Regulation der oligodendroglialen Morphologie in Verbindung steht. Über diese Funktionen unterstützt CNPase Axon–Glia-Interaktionen und die Stabilität des Myelins und greift in Signalwege ein, die die gliale Differenzierung und neuroinflammatorische Antworten steuern. Eine veränderte CNP-Expression oder CNPase-Aktivität wurde mit demyelinisierenden und neurodegenerativen Kontexten in Zusammenhang gebracht, was CNP zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Biologie der weißen Substanz macht.

Das CNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CNPase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CNPase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CNP-Exone abzielen, die für die CNPase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CNPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CNPase HDR-Plasmid (h) und CNPase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.