CNOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412433

Übersicht

ENOX1 kodiert den Ecto-NOX-Disulfid/Thiol-Austauscher CNOX, eine mit der Plasmamembran assoziierte Oxidoreduktase, die den Austausch von Proteindisulfidbindungen mit der Oxidation von NADH koppelt und zur Redoxhomöostase an der Zelloberfläche beiträgt. Die ENOX1-Aktivität wird mit der Regulation des extrazellulären Elektronentransfers, der Modulation des Gleichgewichts reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) sowie der Koordination wachstumsbezogener oszillatorischer Redoxprozesse in Verbindung gebracht, die Proliferation und metabolische Anpassung beeinflussen können. Aufgrund seiner Funktionen in der Redoxsignalgebung und im membranassoziierten Elektronentransport wird ENOX1 in Zusammenhängen wie der Antwort auf oxidativen Stress, der vaskulären Biologie und zellulären Phänotypen mit veränderter Redoxkontrolle untersucht. Eine dysregulierte ENOX1-Expression oder -Aktivität wurde in mehreren krankheitsassoziierten Transkriptionsprogrammen beschrieben, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für die Untersuchung redoxabhängiger Signalwege und metabolischer Reprogrammierung in humanen Zellen unterstreicht.

Das CNOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ENOX1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ENOX1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ENOX1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CNOX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ENOX1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CNOX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ENOX1-Exone abzielen, die für die CNOX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ENOX1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CNOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CNOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ENOX1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CNOX HDR-Plasmid (h) und CNOX HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ENOX1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ENOX1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.