Clusterin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417830-ACT

Humanes **CLU** kodiert **Clusterin**, ein sezerniertes und intrazelluläres Glykoprotein, das als extrazellulärer Chaperon wirkt und die Proteostase, den Lipidtransport sowie die Komplementinhibition reguliert. Clusterin beeinflusst Programme des Zellüberlebens, indem es oxidativen Stress, Apoptose und die Beseitigung fehlgefalteter oder aggregierter Proteine moduliert, und greift dabei in inflammatorische Signalwege sowie in das Remodeling der extrazellulären Matrix ein. Es ist an Neurodegeneration und kardiovaskulärer Biologie beteiligt – über Effekte auf den Umgang mit Amyloid, die synaptische Integrität und vaskuläre Entzündungen – und wird in der Tumorbiologie häufig aufgrund seiner Rollen in Stressanpassung und Mechanismen der Therapieresistenz untersucht. Diese Funktionen machen CLU zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Signalwege zu analysieren, die proteotoxischen Stress, Immunregulation und Gewebeschädigungsantworten miteinander verknüpfen.

Clusterin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLU-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Clusterin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLU-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLU-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Clusterin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLU-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Clusterin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Clusterin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLU-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.