CLS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407799-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRLS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLS1: sc-514986
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRLS1 kodiert Cardiolipin-Synthase 1 (CLS1), ein Enzym der inneren Mitochondrienmembran, das den letzten Schritt der Cardiolipin-Biosynthese aus Phosphatidylglycerol und CDP-Diacylglycerol katalysiert. Cardiolipin ist ein charakteristisches Phospholipid, das für die Organisation und Stabilität der Komplexe der oxidativen Phosphorylierung, die Aufrechterhaltung der Cristae-Architektur und eine effiziente mitochondriale ATP-Produktion erforderlich ist. Über seine Rolle beim mitochondrialen Lipid-Remodeling und der Funktion der Atmungskette beeinflusst CLS1 die Apoptose-Signalgebung, die Mitophagie und zelluläre Antworten auf metabolischen Stress. Eine veränderte Cardiolipin-Homöostase und eine beeinträchtigte mitochondriale Bioenergetik infolge einer CRLS1-Dysfunktion sind relevant für Studien zur neuromuskulären und kardiometabolischen Pathophysiologie sowie zu umfassenderen Mechanismen mitochondrialer Erkrankungen.
CLS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRLS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRLS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRLS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRLS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.