Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ClpP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424769
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ClpP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ClpP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ClpP Anticuerpo (B-12): sc-271284
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ClpP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424769 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Clpp codifica la subunidad proteolítica ClpP de la peptidasa caseinolítica mitocondrial dependiente de ATP, una proteasa de serina que se asocia con la unfoldasa ClpX para eliminar proteínas dañadas o mal plegadas y mantener la proteostasis dentro de la matriz. Este eje de control de calidad sostiene la capacidad de fosforilación oxidativa, limita el estrés proteotóxico y oxidativo, e influye en la señalización de la respuesta mitocondrial a proteínas mal plegadas. La actividad de ClpP se conecta con vías que regulan el metabolismo energético, la biogénesis mitocondrial y programas transcripcionales de adaptación al estrés. La función desregulada de CLPP se ha vinculado a fenotipos de disfunción mitocondrial y se investiga con frecuencia en modelos de neurodegeneración, enfermedades metabólicas y reprogramación mitocondrial asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ClpP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clpp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clpp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clpp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ClpP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clpp para la investigación de la señalización de ClpP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Clpp críticos para la función de ClpP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clpp para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ClpP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ClpP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clpp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ClpP (m) y el plásmido HDR ClpP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clpp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clpp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.