CLN5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408473-ACT

CLN5は可溶性のリソソーム糖タンパク質をコードしており、リソソームの恒常性維持や、エンド—リソソーム系における高分子の効率的な分解・更新に関与すると考えられています。CLN5はリソソーム輸送およびプロテオスタシス経路にも関与し、オートファジー—リソソーム機能や細胞内クリアランスに影響を与えます。これらは神経細胞の健康や寿命の長い細胞種にとって重要なプロセスです。CLN5機能の破綻は、神経セロイドリポフスチン症（NCL）と関連しており、これは自家蛍光性の貯蔵物質の蓄積と進行性の細胞機能障害を特徴とする神経変性のリソソーム蓄積病です。そのためCLN5は、リソソーム生物学、神経変性、ならびに分解能低下に伴うストレス応答のモデル研究で頻繁に解析されています。

CLN5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLN5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLN5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLN5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLN5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLN5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLN5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLN5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLN5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLN5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。