Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLN2 (h): sc-405204
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CLN2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CLN2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLN2 Antibody (G-3): sc-393961
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLN2 (h) | sc-405204 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TPP1 code la tripeptidyl peptidase 1 (CLN2), une protéase lysosomale à sérine qui enlève des tripeptides des extrémités N‑terminales des polypeptides au cours du renouvellement intralysosomal des protéines. L’activité de CLN2 soutient des processus cataboliques dépendants du lysosome, en lien avec le flux autophagie–lysosome, le trafic endolysosomal et le maintien de la protéostasie dans des types cellulaires à forte activité métabolique. La perte de fonction de TPP1 perturbe la protéolyse lysosomale et contribue à la vulnérabilité neuronale ; des variants pathogènes sont associés à la lipofuscinose céroïde neuronale liée à CLN2 et, plus largement, à des pathologies de surcharge lysosomale. En conséquence, TPP1/CLN2 est largement étudié dans des modèles de fonction lysosomale, de réponses au stress et de mécanismes couplant une dégradation altérée à une dysfonction cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLN2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TPP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TPP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TPP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLN2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TPP1 pour l'étude de la signalisation de CLN2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TPP1 essentiels à la fonction de CLN2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TPP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CLN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CLN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TPP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CLN2 plasmide HDR (h) et le CLN2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TPP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TPP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.