CLK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419690

Übersicht

Clk4 kodiert die CDC-like Kinase 4 (CLK4), eine Dual-Spezifitätskinase, die serin-/argininreiche (SR-)Spleißfaktoren phosphoryliert und dazu beiträgt, das prä-mRNA-Spleißen mit transkriptionellen Programmen zu koordinieren. Durch die Modulation der SR-Proteinaktivität beeinflusst CLK4 alternative Spleißentscheidungen, die den Zellzyklusverlauf, die Differenzierung und die stressabhängige Genexpression mitbestimmen. Die Signalwege der CLK-Familie greifen in Netzwerke der RNA-Prozessierung ein, die die Proteomvielfalt formen; eine veränderte Spleißregulation wird in experimentellen Modellen häufig mit onkogener Transformation und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. In Mausmodellen bietet die Störung von Clk4 einen gut handhabbaren Ansatz, um zu untersuchen, wie Phosphorylierungsdynamiken am Spleißosom gewebespezifische Transkriptisoformen und nachgeschaltete Signalweg-Ausgänge beeinflussen.

Das CLK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clk4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clk4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clk4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLK4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clk4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLK4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clk4-Exone abzielen, die für die CLK4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clk4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CLK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clk4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLK4 HDR-Plasmid (m) und CLK4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clk4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clk4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.