Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLK4 (m): sc-419690

Présentation

Clk4 code la kinase 4 de type CDC (CLK4), une kinase à double spécificité qui phosphoryle les facteurs d’épissage riches en sérine/arginine (SR) et aide à coordonner l’épissage du pré‑ARNm avec les programmes transcriptionnels. En modulant l’activité des protéines SR, CLK4 contribue à des choix d’épissage alternatif qui influencent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’expression de gènes répondant au stress. La signalisation de la famille CLK s’entrecroise avec des réseaux de maturation de l’ARN qui façonnent la diversité du protéome, et une régulation altérée de l’épissage est fréquemment associée à la transformation oncogénique et à des phénotypes neurodéveloppementaux dans des modèles expérimentaux. Dans des systèmes murins, perturber Clk4 constitue une approche pratique pour analyser comment la dynamique de phosphorylation associée au spliceosome affecte des isoformes de transcrits spécifiques des tissus et les sorties des voies de signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLK4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clk4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clk4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clk4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLK4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clk4 pour l'étude de la signalisation de CLK4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clk4 essentiels à la fonction de CLK4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clk4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CLK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clk4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLK4 plasmide HDR (m) et le CLK4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clk4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clk4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.