Plasmide Double Nickase (h) CLCA1: sc-402998-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLCA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLCA1 Double Nickase (h) et le plasmide CLCA1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CLCA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLCA1 Antibody (E-4): sc-271156
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLCA1 | sc-402998-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLCA1 | sc-402998-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLCA1 (chloride channel accessory 1) code une glycoprotéine sécrétée et associée à la membrane qui module la conductance épithéliale du chlorure et la physiologie du mucus, en particulier au niveau des muqueuses gastro-intestinales et des voies respiratoires. Il est fréquemment associé à la différenciation des cellules caliciformes et à la régulation de la production de mucines, en s’intégrant à des programmes inflammatoires et de remodelage épithélial qui façonnent la fonction de barrière. Une expression altérée de CLCA1 a été observée dans des états inflammatoires des muqueuses et dans des cancers épithéliaux, où il est souvent utilisé comme marqueur de l’état de différenciation et des changements de composition des lignages sécrétoires. Ces propriétés font de CLCA1 une cible utile pour étudier la régulation du transport ionique épithélial, l’homéostasie du mucus et les réseaux transcriptionnels associés à l’inflammation.
CLCA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLCA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLCA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLCA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLCA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.