CLC-6 Double Nickase Plasmid (h): sc-405938-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLC-6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLC-6 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLC-6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLCN6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLC-6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLC-6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CLCN6** kodiert **CLC-6**, einen intrazellulären Chlorid/Protonen-Austauscher aus der CLC-Familie, der überwiegend an endosomalen und lysosomalen Membranen lokalisiert ist. Durch die Kopplung des Anionentransports an die Ansäuerung von Organellen trägt CLC-6 zum endosomalen Transport, zum Rezeptor-Recycling und zur lysosomenabhängigen Proteostase bei – Prozesse, die sich mit Autophagie und übergeordneten vesikulären Transportwegen überschneiden. Störungen der CLCN6-Funktion wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und Signaturen lysosomaler Dysfunktion in Verbindung gebracht und sind daher für Studien zur neuronalen Homöostase und zu endolysosomalen Stressantworten relevant. Die Biologie von CLC-6 ist zudem informativ in Modellen, die Ionenhomöostase, membranerregbarkeitsnahe Prozesse und die Regulation des Organellen-pH untersuchen.
CLC-6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLCN6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLCN6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLCN6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLCN6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.