claudin-7 Double Nickase Plasmid (m): sc-424740-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das claudin-7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- claudin-7 Double-Nickase-Plasmid (m) und claudin-7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cldn7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
claudin-7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
claudin-7 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Cldn7** kodiert Claudin-7, ein tetraspanes Tight-Junction-Protein, das zur Aufrechterhaltung der Integrität epithelialer Barrieren und der apikal-basolateralen Polarität beiträgt, indem es die parazelluläre Permeabilität und die Zell-Zell-Adhäsion reguliert. Claudin-7 ist an der Assemblierung von Tight Junctions und der epithelialen Morphogenese beteiligt und kann Signalnetzwerke beeinflussen, die mit dem Umbau von Zellkontakten verknüpft sind, einschließlich Signalwegen, die die Organisation des Zytoskeletts und die Zellmigration koordinieren. Eine veränderte **CLDN7**-Expression oder -Lokalisation wurde in mehreren Geweben mit epithelialer Dysplasie, entzündungsbedingten Barrierestörungen und tumorfördernden Phänotypen in Verbindung gebracht, was CLDN7 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Stabilität von Zellkontakten und epithelialen Zustandsübergängen macht. In Mausmodellen ermöglicht die Störung von **Cldn7** die Untersuchung, wie Tight-Junction-Komponenten die Gewebehomöostase und Reaktionen auf mikroumgebungsbedingte Signale prägen.
claudin-7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cldn7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cldn7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cldn7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cldn7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.