Plasmide CRISPR d'Activation (h) claudin-1: sc-400609-ACT

CLDN1 code la claudine-1, une protéine tétraspan des jonctions serrées qui contribue à établir l’intégrité de la barrière épithéliale et la polarité apico-basale en régulant la perméabilité paracellulaire et l’assemblage des brins jonctionnels. La claudine-1 participe au dialogue entre jonctions serrées et jonctions d’adhérence, influençant l’organisation du cytosquelette ainsi que des voies de signalisation liées à la différenciation et aux réponses au stress. Une expression ou une localisation altérée de CLDN1 est associée à une perturbation de l’homéostasie épithéliale, à des modifications de l’adhésion et de la migration cellulaires, ainsi qu’à une dysfonction de la barrière observée dans des contextes inflammatoires et néoplasiques. En tant que composant des jonctions serrées, la claudine-1 est également étudiée dans les interactions hôte–pathogène et la régulation, selon les tissus, de la perméabilité.

claudin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLDN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

claudin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLDN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLDN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de claudin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLDN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de claudin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie claudin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLDN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.