Clathrin Light Chain A/CLTA Double Nickase Plasmid (h): sc-403962-NIC

CLTA kodiert die Clathrin-Leichtkette A, eine zentrale Komponente clathrinbeschichteter Vesikel, die während der Endozytose zusammen mit der Clathrin-Schwerkette den Aufbau und die Dynamik des Clathrin-Gitterwerks moduliert. CLTA unterstützt die rezeptorvermittelte Internalisierung, das Recycling synaptischer Vesikel sowie den Transport zwischen Plasmamembran, Endosomen und dem trans-Golgi-Netzwerk und ist damit an Signalwegen beteiligt, die die Membranzusammensetzung und die Abschwächung von Signalen steuern. Über seine Rolle bei der Fracht-/Cargo-Sortierung und dem endosomalen Routing beeinflusst CLTA den Umsatz von Rezeptoren wie Wachstumsfaktorrezeptoren und Immunrezeptoren und prägt dadurch nachgeschaltete Signalübertragung und zelluläre Homöostase. Eine Fehlregulation des clathrinvermittelten Transports wurde mit neurodegenerativen Prozessen, veränderter metabolischer Signalgebung sowie krebsrelevanten Veränderungen im Rezeptor-Recycling und in der Nährstoffaufnahme in Verbindung gebracht, wodurch CLTA einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der Vesikelbiologie darstellt.

Clathrin Light Chain A/CLTA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLTA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLTA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLTA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLTA-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.