Plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-7 (m): sc-419708

Présentation

Ccr7 code pour le récepteur de chimiokines CKR-7 (CCR7), un RCPG qui se lie à CCL19 et CCL21 afin d’orienter la chimiotaxie et le positionnement des lymphocytes T, des lymphocytes B et des cellules dendritiques. La signalisation de CCR7 active des voies dépendantes de Gαi qui influencent le remodelage de l’actine, l’activation des intégrines et les voies MAPK/PI3K, soutenant le trafic des leucocytes à travers l’endothélium lymphatique et les organes lymphoïdes secondaires. Chez la souris, Ccr7 est essentiel à la surveillance immunitaire, à l’organisation des tissus lymphoïdes et à la migration régulée des cellules immunitaires lors de l’inflammation. Un trafic dépendant de CCR7 déréglé est fréquemment étudié dans des modèles d’auto-immunité, d’inflammation chronique et de microenvironnements tumoraux immunitaires, où des altérations de l’homing cellulaire peuvent influencer l’évolution de la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccr7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccr7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccr7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CKR-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccr7 pour l'étude de la signalisation de CKR-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccr7 essentiels à la fonction de CKR-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccr7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CKR-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CKR-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccr7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CKR-7 plasmide HDR (m) et le CKR-7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccr7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccr7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.