Partículas Lentivirales de Activación (h) CKR-5: sc-402548-LAC

CCR5 (CKR-5) codifica un receptor de quimiocinas de siete dominios transmembrana que se une a ligandos como CCL3, CCL4 y CCL5 para coordinar el tráfico de leucocitos y la señalización inflamatoria. La activación de CCR5 pone en marcha vías dependientes de Gαi que modulan el flujo de calcio intracelular, la señalización PI3K–AKT, las cascadas MAPK y la remodelación del citoesqueleto que sustenta la quimiotaxis y la dinámica de la sinapsis inmunológica. En tejidos humanos, la expresión de CCR5 está enriquecida en subpoblaciones de células T, macrófagos y células dendríticas, lo que lo vincula con programas de polarización y migración de células inmunitarias en microambientes inflamados. La desregulación de la señalización y la expresión de CCR5 se ha estudiado en afecciones inflamatorias crónicas, neuroinflamación e interacciones huésped–patógeno, donde los gradientes de quimiocinas determinan el reclutamiento celular.

Las partículas de activación lentiviral CKR-5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CCR5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CKR-5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CCR5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CKR-5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CCR5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.