Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CKR-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402548-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CKR-5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CKR-5 Double-Nickase-Plasmid (h) und CKR-5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CCR5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CKR-5: sc-17833
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CKR-5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402548-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CKR-5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402548-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCR5 kodiert den Chemokinrezeptor CKR-5, einen siebenfach transmembranären GPCR, der auf Subpopulationen von T‑Zellen, Makrophagen und dendritischen Zellen exprimiert wird und Liganden wie CCL3, CCL4 und CCL5 bindet, um die Chemotaxis von Leukozyten zu steuern. Die CKR-5-Signalübertragung aktiviert heterotrimere G‑Proteine sowie nachgeschaltete PI3K–AKT-, PLCβ–Ca²⁺- und MAPK-Signalwege und reguliert dadurch Migration, Adhäsion und entzündliche Zytokinprogramme. Unterschiede in Expression oder Funktion von CCR5 beeinflussen die Wanderung von Immunzellen und wurden umfassend im Kontext mukosaler Entzündungen und der Immunhomöostase untersucht. CCR5 ist außerdem ein gut etablierter Wirtsfaktor in der Biologie des viralen Zelleintritts und daher ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur infektionsassoziierten Zellsignalübertragung und Rezeptorregulation.
CKR-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCR5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCR5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCR5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCR5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.