CIRP Double Nickase Plasmid (h): sc-405185-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CIRP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CIRP Double-Nickase-Plasmid (h) und CIRP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CIRBP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CIRP: sc-293325
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CIRP Double Nickase Plasmid (h) | sc-405185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CIRP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das kälteinduzierbare RNA-bindende Protein (CIRP), kodiert durch **CIRBP**, ist ein stressreagierendes RNA-Chaperon, das als Antwort auf Hypothermie, UV-Bestrahlung und oxidativen Stress die mRNA-Stabilität, Translation und subzelluläre Lokalisation moduliert. CIRP ist an posttranskriptionellen Regulierungsnetzwerken beteiligt, die die Kontrolle des Zellzyklus, Apoptose und inflammatorische Signalgebung beeinflussen, einschließlich der Dynamik von Stressgranula sowie umfassenderer Wege des RNA-Stoffwechsels. Eine veränderte Expression oder Lokalisation von **CIRBP** wurde mit einer dysregulierten Stressanpassung und Immunantwort in Verbindung gebracht, was für die Krebsbiologie, Neuroinflammation und ischämiebedingte zelluläre Schädigung relevant ist. Als multifunktionales RNA-bindendes Protein stellt CIRP einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie Umweltstress Genexpressionsprogramme auf RNA-Ebene umgestaltet.
CIRP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CIRBP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CIRBP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CIRBP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CIRBP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.