CIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406095

Übersicht

TRIP10 kodiert das Cdc42-interagierende Protein 4 (CIP4), ein Adapterprotein mit F-BAR- und SH3-Domäne, das die Erkennung von Membrankrümmung mit dem Umbau des Aktinzytoskeletts verknüpft. CIP4 wirkt mit Cdc42, Dynamin und N-WASP zusammen, um clathrinvermittelte Endozytose, Vesikeltransport und den Aufbau von kortikalem Aktin zu koordinieren, und beeinflusst dadurch die Internalisierung von Rezeptoren sowie die Abschwächung von Signalen. Über diese Funktionen trägt CIP4 zu Prozessen wie Zellpolarität, Migration und der Dynamik invadopodienähnlicher Ausstülpungen bei und ist damit mit Signalwegen verbunden, die die Zytoskelettorganisation und den Membranumbau regulieren. Eine fehlregulierte TRIP10/CIP4-Aktivität wurde im Zusammenhang mit abweichender Zellbeweglichkeit und Signalprogrammen untersucht, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen mit veränderten endozytischen und aktinbasierten Netzwerken relevant sind.

Das CIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIP10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIP10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIP10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CIP4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIP10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CIP4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIP10-Exone abzielen, die für die CIP4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIP10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIP10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CIP4 HDR-Plasmid (h) und CIP4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIP10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIP10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.